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光片(light sheet)顯微鏡模組

簡要描述:熒片(pian)熒光成(cheng)(cheng)像(xiang)顯微鏡(light sheet microscope)是一種(zhong)快速而柔和的成(cheng)(cheng)像(xiang)技術。該技術憑借優異的三維成(cheng)(cheng)像(xiang)能力、分辨率、更低的光漂白性和光毒(du)性被廣泛(fan)的用于生物醫學研究等領(ling)域(yu)。光片(pian)(light sheet)顯微鏡模組

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  • 更新時間:2021-06-02
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光片(light sheet)顯微鏡模組

光片熒光成像顯微鏡(light sheet microscope)是一種快(kuai)速而(er)柔和的(de)成像技術(shu)。該技術(shu)憑借優異(yi)的(de)三維成像能(neng)力、分辨率(lv)、更低的(de)光漂白性(xing)和光毒性(xing)被廣(guang)泛的(de)用(yong)于(yu)生物醫學研(yan)究等(deng)領域(yu)。

光片顯微(wei)(wei)鏡(jing)的(de)(LSFM或SPIM)與傳統顯微(wei)(wei)鏡(jing)的(de)不同在于激發光的(de)照明方(fang)式(shi),照明光路與探測光路垂直(zhi)放置, 它(ta)的(de)照明光是與一張(zhang)與成像面平(ping)行的(de)薄薄的(de)光片,只有焦平(ping)面的(de)樣品被照亮,而其上下的(de)樣品不受影(ying)響。和傳統熒光照明方(fang)式(shi)相比,光片照明有如下優點:

1)提高(gao)了(le)圖像和(he)(he)背景的反差(cha)(Signal-to-Background Ratio) 和(he)(he)軸向分辨率:光片照明技術保證了(le)焦平面(mian)上下(xia)的樣品不會被激(ji)發(fa),具備和(he)(he)共聚焦顯微鏡類似的光學切片功能;

2)減少了光(guang)漂白和光(guang)毒性(xing):與傳統的(de)熒光(guang)照明技術相比,光(guang)毒性(xing)可(ke)以被降低20-100倍,這樣(yang),我(wo)們就能(neng)在(zai)更接(jie)近生(sheng)理狀態的(de)條件下,對活(huo)體生(sheng)物樣(yang)品(pin)進行(xing)長時間的(de)三維成像;

3)與(yu)激光(guang)共聚焦和雙光(guang)子顯微(wei)(wei)(wei)鏡使(shi)用(yong)低QE的PMT的點掃描成(cheng)(cheng)像相比(bi),光(guang)片(pian)顯微(wei)(wei)(wei)鏡使(shi)用(yong)高QE的CCD或(huo)sCMOS相機進行面(mian)成(cheng)(cheng)像,大大提高了(le)成(cheng)(cheng)像速度和圖(tu)像的信噪比(bi)。共聚焦需要(yao)幾分(fen)(fen)鐘甚至幾小時才能拍(pai)完的樣品(pin),用(yong)光(guang)片(pian)顯微(wei)(wei)(wei)鏡只需要(yao)幾秒到幾分(fen)(fen)鐘。因此,光(guang)片(pian)顯微(wei)(wei)(wei)鏡也特別適合(he)用(yong)于大樣品(pin)成(cheng)(cheng)像。

在多數光(guang)(guang)片系統中,光(guang)(guang)學元(yuan)件是(shi)固定的(de),需要移動樣品(pin)(pin) (或使光(guang)(guang)片從(cong)xyz方向掃過樣品(pin)(pin)) 來獲得完整的(de)3D圖像(xiang)。通過移動或旋轉(zhuan)樣品(pin)(pin),可(ke)以對大樣品(pin)(pin)進行(xing)成(cheng)像(xiang),并(bing)從(cong)多個角(jiao)度拍攝,將這些(xie)多視角(jiao)圖像(xiang)通過特(te)別算法融合在一起后,能夠進一步提(ti)高圖像(xiang)分辨率,并(bing)修(xiu)正(zheng)一些(xie)光(guang)(guang)片技術*的(de)缺(que)陷。

光(guang)片(pian)顯(xian)微(wei)鏡的(de)(de)(de)搭建(jian)的(de)(de)(de)主要困(kun)難在于各個組件的(de)(de)(de)同步,例如相機(ji)和平(ping)移臺,激(ji)(ji)(ji)光(guang)和光(guang)片(pian)的(de)(de)(de)產(chan)生等。為了方便客戶自(zi)主搭建(jian)該設備(bei),上海昊量(liang)光(guang)電設備(bei)有(you)(you)限(xian)公司(si)推出了光(guang)片(pian)顯(xian)微(wei)鏡模塊組件,客戶只需按照(zhao)自(zi)己(ji)的(de)(de)(de)需求(qiu)購(gou)買激(ji)(ji)(ji)光(guang)激(ji)(ji)(ji)發光(guang)源,相機(ji)就可完成(cheng)該系統的(de)(de)(de)搭建(jian),如有(you)(you)需要錢也(ye)提供(gong)整套解決(jue)方案。昊量(liang)光(guang)電推出的(de)(de)(de)模塊主要包塊一下幾款產(chan)品:

1)雙向(xiang)倒置光(guang)片顯(xian)微鏡(jing)模塊(DISPIM)

DISPIM是(shi)一款靈活的易于安(an)裝(zhuang)的光(guang)片顯微鏡(jing)組(zu)件,該(gai)組(zu)件安(an)裝(zhuang)到(dao)倒(dao)置顯微鏡(jing)上時(shi)可(ke)(ke)實現雙向觀測(ce)。該(gai)組(zu)件兩個物(wu)鏡(jing)垂直放(fang)置在(zai)開放(fang)式培(pei)養皿的樣品上方(fang)(fang),物(wu)鏡(jing)與垂直方(fang)(fang)向成(cheng)45°。該(gai)組(zu)件可(ke)(ke)以放(fang)置在(zai)常規倒(dao)置顯微鏡(jing)的頂(ding)部(bu),也(ye)可(ke)(ke)安(an)裝(zhuang)在(zai)我們提(ti)供的RAMM/MIM框架組(zu)件上。

                        

該組件有兩種配置:

①單面系統(iSPIM)

該系統一個物鏡(jing)(jing)通過常規的振鏡(jing)(jing)產生(sheng)移(yi)動(dong)(dong)光(guang)片,使光(guang)片穿過樣(yang)品(pin)(pin),通過振鏡(jing)(jing)移(yi)動(dong)(dong)光(guang)片同時移(yi)動(dong)(dong)壓電物鏡(jing)(jing)掃描臺完成3D成像(xiang)。該系統圖(tu)像(xiang)獲取(qu)樣(yang)品(pin)(pin)迅速,低(di)成本,但是軸向分(fen)(fen)辨率低(di)于XY平面分(fen)(fen)辨率。

②雙面系統(diSPIM)

在該系統中兩邊(bian)都包含光片掃(sao)(sao)描(miao)(miao)儀、壓(ya)電物鏡掃(sao)(sao)描(miao)(miao)臺和(he)相(xiang)機,在實驗(yan)中兩個(ge)物鏡交替用(yong)于照明和(he)檢(jian)測(ce),同(tong)時在正交方向獲得樣品的(de)(de)圖像,并且(qie)將兩個(ge)方向的(de)(de)收集的(de)(de)數據集進行計算合并生成(cheng)各向同(tong)性(xing)的(de)(de)3D圖,如果實驗(yan)需要也可以單(dan)面模(mo)式運(yun)行。該模(mo)塊XY&Z軸都具有較好的(de)(de)分辨率,但(dan)是(shi)需要購置更多的(de)(de)硬件,且(qie)后期需要更多的(de)(de)圖像處(chu)理。

2)透明組織(zhi)光(guang)片顯微鏡(ct-SPIM)

該(gai)光片顯(xian)微(wei)鏡(jing)的外形(xing)結(jie)構與diSPIM/iSPIM結(jie)構類似,但(dan)是(shi)不(bu)包括倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)。該(gai)系(xi)(xi)統(tong)配置經過優化(hua)可對透(tou)明組織進行成(cheng)像(xiang)(xiang)。樣(yang)品放(fang)置在電(dian)動XYZ平(ping)臺(tai)上(shang),由于樣(yang)品尺寸較大,平(ping)臺(tai)掃描是(shi)其成(cheng)像(xiang)(xiang)的可行方式(shi)。采集速度受相機(ji)幀(zhen)頻限制。該(gai)模塊(kuai)也是(shi)擁有兩(liang)種(zhong)不(bu)同配置,即單面成(cheng)像(xiang)(xiang)和雙面成(cheng)像(xiang)(xiang)系(xi)(xi)統(tong)。

3)傾斜單面光片顯微(wei)鏡(OSPIM)

OSPIM系(xi)統(tong)是(shi)一個單面(mian)光片(pian)系(xi)統(tong),上面(mian)物(wu)鏡(jing)(jing)以60°傾角(jiao)安裝(zhuang)在(zai)(zai)RAMM框架上,底測顯(xian)微鏡(jing)(jing)物(wu)鏡(jing)(jing)用(yong)于產生光片(pian),該平(ping)臺(tai)可以安裝(zhuang)在(zai)(zai)商業上的倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)(jing)上。

                           

此外還提供了搭建(jian)光片顯微鏡中常用的(de)模(mo)組,

1)光(guang)(guang)纖耦合激光(guang)(guang)掃描儀

光(guang)(guang)(guang)纖耦合(he)激光(guang)(guang)(guang)掃(sao)(sao)描儀是(shi)一款緊湊(cou)而通(tong)(tong)用(yong)的(de)2D掃(sao)(sao)描單(dan)元。設計適用(yong)于生(sheng)成SPIM光(guang)(guang)(guang)片。用(yong)戶提(ti)供的(de)光(guang)(guang)(guang)束(shu)通(tong)(tong)過(guo)標準光(guang)(guang)(guang)纖連接器進(jin)入掃(sao)(sao)描儀,通(tong)(tong)過(guo)二維MEMS掃(sao)(sao)描鏡掃(sao)(sao)描成光(guang)(guang)(guang)片。掃(sao)(sao)描儀通(tong)(tong)常使(shi)用(yong)C型接口連接到顯微鏡上。

2)多重浸漬物鏡

該物(wu)鏡主要(yao)設計用于光片顯微鏡檢查透明組織(zhi)樣品(pin)。由(you)于物(wu)鏡具有*的彎曲表面(mian),因此物(wu)鏡可(ke)(ke)以(yi)在沒有任何校正環的情況下工作在任何折(zhe)射率的介(jie)質(zhi)中。物(wu)鏡可(ke)(ke)以(yi)浸入到(dao)苛刻的介(jie)質(zhi),例如DBE和BABB。

光片(light sheet)顯微鏡模組

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